产品描述
一系列结构多样的配体,从光子到大肽,激l活GPCRs来激发它们的生理功能。配体结合的GPCRs,反过来,起到鸟呤核苷酸交换的作用Gβγ存在下Gα亚基上的GDP与GTP交换的催化因子,导致Gα亚单位与Gβγ二聚体分离形成两个功能单元(Gα和Gβγ)。Gα和Gβγ亚单位都向各种细胞信号通路发出信号。根据顺序与功能同源,G蛋白分为四个家族:Gs,Gi、Gq和G12。增加这些G蛋白的效应器和相互作用蛋白的数量已经被鉴定,生理上G蛋白参与的过程正在增殖。
体外用GTPγS/GDP处理蛋白以用作阳性和阴性的对照
注意:在细胞体内环境条件下大约有10%的Cdc42被激l活,ActiveRac,而在体外用GTPγS处理大约有90%的Cdc42被激l活。
1. 准备两个离心管,每个管中各加入0.5 mL的细胞提取物(如果是纯的Cdc42蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug)。
2. 每个管中加入20ul 0.5M EDTA(终浓度即为20 mM)。
3. 一个管中加入5ul的100X GTPγS(终浓度即为100 uM)作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100XGDP(终浓度即为1 mM)作为阴性对照。
4. 将离心管置于30°C条件下反应30min并不断搅动。
5. 终止反应:将管置于冰上并加入32.5ul 1M MgCl2(终浓度即为60mM)。
分析原理
基于构型特异性抗Gα13-GTP的NewEast生物科学Gα13活化检测试剂盒从细胞提取物或体外检测活性Gα13-GTP水平的单克l隆抗l体GTPγS负载Gα13活化试验。简单地说,抗活性Gα13小鼠单克l隆抗l体用含有Gα13-GTP的细胞裂解液培养。结合的活性Gα13将被蛋白质A/G琼脂糖。用兔抗α13多克l隆抗l体免l疫印迹法检测沉淀的活性Gα13。
ActiveRac-武汉纽斯特公司由武汉纽斯特生物技术有限公司提供。武汉纽斯特生物技术有限公司坚持“以人为本”的企业理念,拥有一支高素质的员工队伍,力求提供更好的产品和服务回馈社会,并欢迎广大新老客户光临惠顾,真诚合作、共创美好未来。武汉纽斯特——您可信赖的朋友,公司地址:湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号光谷生物城B3-3栋3楼,联系人:黄经理。